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磷酸钙法转染DNA是基于形成磷酸钙-DNA沉淀的原理：磷酸钙可促使细胞膜和DNA的结合，之后通过细胞内吞的作用将外源DNA转入目的细胞。该方法曾被用于多种细胞系的转染。百奥莱博的磷酸钙法细胞转染试剂是在传统磷酸钙法的基础上经过特别优化，不仅在转染效率有了较大提高，且降低了细胞毒性，特别适合于293或293T细胞的转染，对其他大多数常见细胞如Hela、CHO也具有较好的转染效果，不仅适用于细胞的瞬时转染，且适用于稳转株的筛选。本制品为无菌包装，可直接使用。

• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，确保A260/A280＞1.8，且电泳检测抽提到的质粒90%以上都是超螺旋。
  
• 在用磷酸钙法转染细胞时应使用浓度不高于5%的CO₂，CO₂的最佳浓度为3%左右。
  
• BBS溶液的pH值直接关系到转染效率，尽量避免把BBS溶液长时间暴露在空气中，以免被空气中的CO₂酸化。
  
• 转染时由于质粒、细胞不同，最佳的质粒用量需自行摸索。
  
• 本制品仅作科研用途!

• 对于贴壁细胞(以6孔板为例)
  
  • 转染前一天(20-24h)，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染时密度为70～90%。
    
  • 在转染前30～60min，吸去细胞培养液，加入新鲜的完全培养液(不含抗生素)2mL。
    注：转染时最好使用新鲜配制的培养液；转染用的培养液可以在配制后分装冻存，使用时再解冻。
    
  • 取2～6μg待转染的质粒DNA(质粒总体积不宜超过20μL)，加入到100μL CaCl₂溶液中，充分混匀。
    
  • 把DNA- CaCl₂溶液加入到100 μLBBS溶液中，混匀，室温孵育10～20min。此时不会产生可见的沉淀。
    注：该步骤顺序不能反，需把DNA- CaCl₂溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA- CaCl₂溶液中。
    
  • 把DNA- CaCl₂-BBS混合物均匀滴加到整个6孔板内。5% CO₂，37℃培养细胞。
    
  • 根据实验要求和磷酸钙对于不同细胞的毒性不同，在4-16h后轻轻晃动培养板数次以充分悬浮一些磷酸钙沉淀，吸去含磷酸钙沉淀的培养液，加入2mL新鲜的完全培养液，继续培养。
    
  • 通常在转染约24h后就可以检测到转染基因的表达。
• 对于悬浮细胞(以6孔板为例)
  
  • 离心收集悬浮细胞，用PBS洗涤一次。
    
  • 按照上面的步骤3和4制备DNA- CaCl₂-BBS混合物。
    
  • 每10⁶个细胞的沉淀，用100μL DNA- CaCl₂-BBS混合物重新悬浮，室温放置20min。
    
  • 在一个6孔板孔内加入2mL完全培养液(不含抗生素)，然后加入来自上一步的细胞-DNA- CaCl₂-BBS混合物，混匀。
    
  • 5% CO₂，37℃培养细胞。
    
  • 根据实验要求和磷酸钙对于不同细胞的毒性不同，在4-16h后离心收集细胞，用PBS洗一次，然后用2mL完全培养液重新悬浮细胞，继续培养。
    
  • 通常在转染约24小时后就可以检测到转染基因的表达。